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北京航空航天大學:開發(fā)納米電穿孔-DNA張力傳感系統(tǒng),用于評估癌癥耐藥性

更新時間:2025-03-13   點擊次數(shù):88次

體外藥物評估在新藥開發(fā)領域具有加速藥物篩選、提高藥物安全性的作用,對個體化醫(yī)療具有重要意義。但傳統(tǒng)藥物評估過程中,藥物遞送方法依賴于細胞和藥物的共同培養(yǎng),藥物分子通過被動擴散的方式被細胞內(nèi)化(>數(shù)小時)和細胞活力測量(>1天)的限制,這構成了臨床藥物篩選和開發(fā)的障礙。因此,快速、準確地藥物評估的新技術仍具有廣泛的需求。


該研究報告了一種納米電穿孔-DNA張力傳感生物芯片,由納米電穿孔遞送模塊和DNA張力傳感檢測模塊組成。兩模塊之間通過拼圖式的結構組裝,增強了器件的靈活性,允許模塊的獨立設計和替換,提供個性化定制的可能,以及支持系統(tǒng)的擴展和升級


為驗證納米電穿孔介導的藥物輸送的速度、效率和安全性,首先建立了一個細胞物理模型,分析了納米通道上細胞周圍的電場和電勢分布(圖2a-c)。結果顯示,當施加的系統(tǒng)電壓在10V-40V范圍內(nèi)時,會產(chǎn)生>1V的跨膜電勢(細胞膜內(nèi)外的電勢差),成功地在細胞膜上進行了電穿孔。與此同時,納米通道具有聚焦電場的功能(圖2b),確保在低電壓下有足夠的電泳力將藥物分子推入細胞內(nèi)。隨后驗證了納米電穿孔遞送模塊較高的安全性(98%)和高效的遞送效率(90%)(圖2d-f),同時將細胞內(nèi)遞送速度提高了103倍,藥物內(nèi)化時間縮短至~3秒。


在納米電穿孔遞送模塊完成藥物遞送后,細胞被消化后沿著微流道進入DNA張力傳感器模塊。該DNA張力傳感器通過修飾的自發(fā)地嵌入細胞膜。在藥物的刺激作用下,一旦細胞力學變化超過DNA張力傳感器預設的力的閥值,DNA張力傳感器發(fā)生結構性變化,導致熒光信號的產(chǎn)生。通過分析細胞力學特性的變化情況進而分析細胞的活性。在此,我們使用DNA張力傳感器模塊評估了在不同濃度(0、20、40、60和80 μg/mL)下藥效。其結果和CCK-8試驗對于細胞存活率的定量結果一致,確認了這一DNA張力傳感器用于細胞存活評估的可靠性

最后,以抗腫瘤藥物DOX作為藥物模型,并采用A549細胞(人類非小細胞肺癌)作為細胞模型進一步驗證了NDT平臺的功能性。結果顯示,NDT介導的藥物遞送,在1分鐘內(nèi)可觀察到DOX(紅色熒光信號)被成功遞送進細胞內(nèi)(圖3a-b)。而且,在同一藥物濃度的情況下,基于納米電穿孔技術的NDT平臺能有效地提高了細胞的藥物內(nèi)化率。同時,DNA張力傳感器模塊能夠以熒光信號的強弱直接、快速(<30分鐘)地反映藥物刺激下細胞活性的變化情況(圖3c-e)。而傳統(tǒng)試驗需要> 24小時才能進行一輪藥物評估。研究結果證明了該平臺具有高速、高效和安全性,是一種簡單而強大的臨床藥物篩選工具。

來源:傳感器專家網(wǎng)

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